GLaDOS (Genetic Lifeform and Disk Operating System), kurgusal bir video oyunu karakteridir. Yapay zekalı bir bilgisayar sistemidir. Portal oyunlarındaki ana düşmandır. Erik Wolpaw ve Kim Swift tarafından yaratılmış, Ellen McLain tarafından seslendirilmiştir. İlk olarak oyuncuya Aperture Science'taki deneylerde yardım eder. Fakat daha sonradan oyuncuyu öldürmeye çalışır. Zaten daha önceden delirerek Aperture Science çalışanlarını sinir gazı ile öldürmüştür. İlk oyunda Chell tarafından yok edilmiştir fakat oyunun kapanış müziği "Still Alive"da hala yaşadığı ortaya çıkmıştır.
Aslen oyunda GLaDOS'tan başka karakterler de yer alacaktı fakat GLaDOS oyunda karşılaşılan tek karakter olmuştur.
